研究22种苯二氮口类药物检测方法

前 言

BZDs 属于第二代镇静催眠药，能通过 γ-氨基丁酸（GABA）受体抑制中枢神经系统，从而产生镇静催眠、抗忧虑、抗惊厥和肌肉松弛作用[1]。该类药物多为1,4-苯并二氮□的衍生物，自从 1961 年氯氮□应用于临床以来，已合成了 300 多种该类化合物，并进行了药理实验。目前临床常用的有 20 余种，如地西泮、硝西泮、奥沙西泮、三唑仑、艾司唑仑和咪达唑仑等。由于该类药物具有吸收完全、戒断症状轻、不良反应小等优点，已成为目前首选的镇静催眠药物，但因其具有容易得到、使用剂量小、体内代谢快等特点，也成为世界范围内滥用程度最大的一类药物[4]。近几年来，由于人们的工作和生活压力日益增大，针对睡不着的中成药及保健食品越来越多，有的商家为了增强中成药的药效和达到其保健食品广告吹嘘的作用，违禁在中成药及保健食品中添加 BZDs。据报道，BZDs 常被个别畜牧业饲养者作为生长促进剂添加于饲料中，使动物嗜睡少动，减少动物维持体能的营养物质消耗，有益于增重；或在动物运输和屠宰过程中使用，减轻动物机体对不良刺激的反应，降低死亡率，防止肉质的变化。但该类药物进入机体后主要在肝脏中经肝药酶代谢，多数代谢产物仍具有与母体相同的活性和药理作用，再进一步代谢消除时间较长，如氟西泮半衰期为 2 至 3

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第二部分 LC-MS/MS 检测猪肉样品中 22 种 BZDs残留的方法研究

1 仪器与材料

1.1 主要仪器

同第一部分1.1 主要仪器;。

1.2 主要试剂与标准品

2. 分析方法

2.1 试样的制备与保存

取猪肉样品约 500 g，用组织捣碎机捣碎，装入洁净容器作为试样，密封并做

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第二部分 LC-MS/MS 检测猪肉样品中 22 种 BZDS 残留的方法研究 .................. 371 仪器与材料 ........................................................................................................ 372. 分析方法 ........................................................................................................... 373. 结果 ................................................................................................................... 384.讨论 ..................................................................................................................... 44第三部分 LC-MS/MS 同时检测牛奶样品中 22 种 BZDS 残留量的方法研究 ...... 481 仪器与材料 ........................................................................................................ 482 分析方法 ............................................................................................................ 48......................................

第三部分 LC-MS/MS同时检测牛奶样品中22种BZDs残留量的方法研究

1 仪器与材料

1.1 主要仪器

同第二部分1.1 主要仪器;。

1.2 主要试剂与标准品

乙酸铅 分析纯 重庆博艺化学试剂有限公司其余试剂、标准品同第二部分1.2 主要试剂与标准品;空白牛奶样品均随机购自重庆超市。

2 分析方法

2.1 试样的制备与保存

取有代表性牛奶样品约 2000 g 搅拌均匀后装入洁净容器内密封并做好标识，于 4℃冰箱内保存。

2.2 溶液配制

流动相及标准溶液的配制同第一部分2.2 溶液配制;。

2.3 LC-MS/MS 条件参数

同第一部分2.3 LC-MS/MS 条件参数;。

2.4 样品处理

2.4.1 提取称取 5.0 g 样品于 50 mL 具塞离心管中，加入 100 μg/L 同位素内标 200.0 μL，混匀，依次加入 0.02 mol/L 乙酸铵缓冲溶液 15 mL 和 25 Lβ-盐酸葡萄糖醛甙酶-芳基硫酯酶溶液，加盖后振荡混匀，于 37℃恒温箱中酶解 16 h。取出后加入 5 mL饱和的乙酸铅溶液沉淀蛋白质，充分混匀后用氨水调节 pH≥9.5，加入 15 mL 乙酸乙酯-异丙醇（5:1，v/v）涡旋振荡 5 min，在 6000 r/min 下离心 5 min，取有机相过

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全文结论

1. 本实验通过比较不同溶剂对中成药、保健食品（胶囊、片剂、颗粒剂、口服液、糖浆）、猪肉和牛奶样品中 22 种 BZDs 的提取效果，以及比较不同净化方法对各基质的净化效果，利用 LC-MS/MS 对样品中的 BZDs 进行检测，通过考查方法的回收率和精密度，得出结论，该提取方法准确可靠，灵敏度高，重现性好。2. 通过对色谱、质谱条件的考察，确定 LC-MS/MS 的最优检测条件为：色谱柱：Shimadzu VP-ODS（150 mm×2.0 mm，5.0 μm）；流动相：乙腈和 2 mmol/L 乙酸铵水溶液（含 0.2％甲酸），梯度洗脱；流速：0.30 mL/min；柱温：40℃；进样量：30 μL。质谱条件：电喷雾正离子检测模式(ESI+)，多反应监测(MRM)；电喷雾电压：5.5 V；雾化气压力：0.448 MPa；气帘气压力：0.310 MPa；辅助气流速：0.207 MPa；碰撞气流速：0.069 MPa；离子源温度：650℃；碰撞室入口电压为 10V，碰撞室出口电压为 12 V。在 0.5～50.0 μg/L 范围内线性关系良好，r 均大于等于0.9990，符合检测要求，可用于 22 种 BZDs 的检测。3. 本研究通过对仪器分析条件和样品前处理方法的系统优化，建立了同时检测样品中 22 种 BZDs 的 LC-MS/MS 分析方法。本方法快速、准确、灵敏、实用，为中成药、保健食品、猪肉和牛奶样品中 22 种 BZDs 的含量监测提供了测定标准。参考文献（略）