家养梅花鹿疑似皮肤松弛症的研究

引言

皮肤松弛症(Cutis laxa, CL)是由细胞外基质有缺陷的弹力蛋白合成或结构异常引起的，以全身或局部皮肤异常松弛、下垂、次弹性为共同特征的一组先天性或获得性结缔组织疾病。典型的CL患者的皮肤可以很容易地拉离底层组织，松开后不能短时间恢复到其原始位置。该病罕见发生，主要见于人类，遗传性发病比率为1-2:400000，获得性的发病率更低。冗长的皮肤通常在颈部、手部、及腹股沟最明显，也可以在脸上看到，产生一种过早衰老的面容，严重者累及内脏器官。尚未见其它动物有天然发生的皮肤松弛症现象的报道，因此在人类皮肤松弛症诊断、致病机理和临床治疗研究中，一直缺少有效的天然动物模型。我们在进行家养梅花鹿良种调查时，发现一只雄性成年梅花鹿颈后部皮肤出现十分明显的松弛下垂现象。松弛的皮肤弹力不强，到发情季节颈后部皮肤松弛下垂现象更加严重。没有观察到这只梅花鹿的呼吸、骨骼或生殖泌尿系统有何异常，松弛的皮肤表面没有伤痕，并且产茸量较高(为种公鹿)。这只梅花鹿的颈背部皮肤发生松弛的原因是什么?与人类皮肤松弛症是什么关系?对鹿的健康和生产有无影响?是否还有其它梅花鹿出现这种皮肤松弛现象?因此，对颈背部皮肤松弛梅花鹿进行关于流行病学调查，在文献综述的基础上，采用组织病理学检验和分子生物学诊断技术对该病症进行明确诊断研究，将为阐明梅花鹿皮肤松弛发生的机制奠定基础，为皮肤松弛梅花鹿是否可以作为人类皮肤松弛症研究的天然动物模型指明方向，同时也为养殖梅花鹿的育种和管理提供新的研究课题，必将对梅花鹿的养殖和利用产生深远影响。真皮层的细胞外基质主要由三个蛋白集团组成:包括胶原纤维、弹性纤维和蛋白多糖。弹性纤维为皮肤提供弹性和弹力，它有2个可区分超微结构部分无定形核及围绕无定形核的微纤维。无定形核主要由弹力蛋白组成并占弹性纤维的90%。微纤维为弹力蛋白的沉积提供支架，并且含有原纤维蛋白、微纤维相关糖蛋白，及其它蛋白。.............................

第一章不同类型皮肤松弛症临床症状

1. 1皮肤松弛症类型迄今为止，仅对人类的皮肤疏松症进行了研究观察，尚无其他动物皮肤松弛症的研究报道，所以关于皮肤松弛症的临床症状都是根据人类皮肤松弛症的研究文献进行综述的。1. 1. 1常染色体显性型皮肤松弛症(ADCL)ADCL临床主要表现是皮肤松弛、无弹性和皮赘，开始发病时间从出生到成年早期都有,，并且通常随着年龄的增长而加重。其未老先衰的面容、长人中、高额头、大耳垂及鹰钩鼻是该病的典型面部特征。此外，该病还伴随着从轻微到严重的其它系统疾病，如支气管扩张和肺气肿等心脏和肺部并发症，有时伴随有消化道憩室、庙气或生殖器脱垂严重者还患有更严重的主动脉瘤、严重的先天性肺病和肺动脉疾病、支气管扩张。上述症状存在显著的家族内变异c大约30%ADCL患者没有该病的家族史，为更始突变。1.1.2常染色体隐性型皮肤松弛症((ARCL)ARCL是一组单独类型的经常引起致死的、产生严重的全身症状的全身结缔组织疾病。根据不同基因突变分为许多类型，这些突变基因都以常染色体隐性方式遗传。1.1.2.1 ARCL1型大多数ARCL1型病人都在幼儿期表现出严重的与全身性皮肤松弛症相关联的全身性结缔组织病。所有患者都有一定程度的腹股沟和脐庙、膀肤一输尿管和胃食管返流、以及憩室的形成。膀肤和肠道憩室和/或幽门狭窄伴皮肤松弛是ARCL1诊断标志。严重的肺气肿是隐性遗传ARCL1最常见并具区别性的病症24o ARCL1不同亚型主要临床症状见表1.2.

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1.2小结不同类型遗传性皮肤松弛症有明显的临床特征。这些临床症状的特异性可为由于大量的候选基因的筛查而费钱耗时的目标基因诊断提供帮助。一些皮肤松弛症的代谢和影像学特点如ARCL2A患者糖基化异常检查和鹅卵石样发育不全的脑成像技术检查、ARCL2B患者羊皮纸样皮肤和关节脱臼/痉挛观察、X连锁CL患者枕角X一射线检查或ARCL2B患者由于痉挛所导致的腕关节位置异常观察等的症状都是特异的，甚至能直接进行基因型诊断。获得性皮肤松弛症既往史和家族发病史的调查也对诊断有很大帮助。..............................

第三章 皮肤松弛症分子生................27-363.1 皮肤松弛症产.........27-313.2 分子生物学技术...................31-353.3 小结............... 35-36第二篇 研究内容 .......................36-92第一章 皮肤松弛..........36-401.1 调查对象.................. 361.2 调查方式.............. 361.3 调查内容.............. 36-371.3.1 群体调查 .....................361.3.2 家系.....................36-371.3.3 个体观察..............371.4 调查结果...................... 37-381.4.1 群体调查............... 371.4.2 家系调查和..................... 371.4.3 个体情况....................... 37-381.5 小结.................... 38-40第二章 皮肤松弛梅花鹿................. 40-462.1 材料与方法 .............40-422.2 结果.............. 42-442.3 讨论............... 44-452.4 小结...................... 45-46第三章 皮肤松弛梅.............. 46-513.1 材料与方法 ..........................46-473.2 结果.............. 47-483.3 讨论 ...........48-503.4 小结 .......................50-51第四章 皮肤松弛梅..................... 51-70.....................................

第六章弹性蛋白、Fibulin-5及类赖氨酞氧化酶1蛋白在梅花鹿松弛皮肤组织中的表述及其意义

皮肤松弛症与皮下支持组织结构功能完整性的破坏密切相关，弹性纤维基因(ELN)作为皮肤支持组织细胞外基质的重要功能成分，其功能受影响将导致组织失去弹性发生松弛现象。Fibulin-5是细胞外基质中蛋白Fibulin家族的新成员，能直接与弹性蛋白原结合，并将弹性蛋白原固定于细胞表面，在弹性纤维形成过程中具有重要作用。赖氨酞氧化酶<LOX)是铜依赖性单胺氧化酶，是弹性纤维和胶原纤维发育成熟稳重的关键酶，能影响局部组织的胶原蛋白生成和功能。免疫组织化学是一种在组织切片上对抗原进行定位的研究方法，主要是利用组织细胞内抗原抗体反应检测特异抗原物质与抗体发生反应存在部位而对抗原进行定位分析，具有灵敏、稳定、特异性。本研究通过免疫组化方法对梅花鹿后颈部皮肤内ELN,Fibulin-5, LO.￥基因表述进行探索性研究，来了解皮肤松弛症梅花鹿上述蛋白的表述水平，进一步阐述梅花鹿皮肤松弛的发病机理。

6.1材料与方法6.1.1试验材料皮肤松弛梅花鹿的皮肤组织样品取自吉林省双阳市某养鹿场，对照组梅花鹿皮肤组织取自农业部长白山野生动植物观测站，在全身麻醉现实下利用活体皮肤取样器采集大0号、33号和79号梅花鹿后颈部皮肤松弛部位和正常雄性梅花鹿后颈部皮肤，放入4%甲醛中固定。..............................

结论1、流行病学调查表明，仅在个别家养梅花鹿品种鹿群中发现有极个别梅花鹿个体表现颈背部皮肤松弛现象;该性状有家系发生倾向，可能是一种常染色体隐性遗传性状;该性状对公鹿健康和生产性能没有不利影响。2、组织和细胞病理学研究表明，颈背部皮肤松弛的梅花鹿的真皮弹力纤维和胶原纤维遭到破坏，弹性纤维严重发育不全，出现分离、断裂现象，排列紊乱、呈不规则状;真皮层出现较多的纤维变性区，弹力纤维减少，外形不规则，染色较浅且不均匀，有些区域弹力纤维很少，甚至呈灶状缺失，内部电子密度减低且不均匀，弹性纤维的无定形组分有很多分支和碎片。胶原纤维明显增多，排列紊乱，稀疏不一，肿胀、断裂3、实时荧光定量PCR研究表明，皮肤松弛梅花鹿ELN基因mRNA表述比对照组有明显的增高趋势;皮肤松弛梅花鹿Fibulin-5基因mRNA表述量除33号鹿外，另外2只鹿高于对照组，33号鹿与对照组梅花鹿Fibulin-5基因表述水平不相上下。皮肤松弛梅花鹿LOX基因mRNA表述水平较稳定，与对照组梅花鹿表述量凡乎相同。

参考文献（略）