红立春肠粉 立春红和考马斯亮蓝

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丽春红可以换成其他吗?

可以换成考马斯亮蓝。

丽春红（PonceauS）也称猩红，可以用于PVDF膜、硝酸纤维素膜（nitrocellulosemembrane）和醋酸纤维素膜（celluloseacetatemembrane）上的蛋白的检测。丽春红带负电荷，可以与带正电荷的氨基酸残基结合，同时丽春红也可以与蛋白的非极性区相结合，从而形成红色的条带。丽春红染色的灵敏度不及考马斯亮蓝染色。丽春红对蛋白的染色是可逆的，染色后可以用蒸馏水，PBS或其它适当溶液洗去。因此，蛋白质N端测序时将SDS-PAGE胶上的蛋白转移到PVDF膜，用丽春红染色后将目的条带切下用于测序。丽春红染色液不适用于尼龙膜上的蛋白的检测。

western blotting的原理、操作步骤及意义

一。免疫印迹法

免疫印迹法（immunoblottingtest，IBT）亦称酶联免疫电转移印斑法（enzymelinkedimmunoelectrotransferblot，EITB），因与Southen早先建立的检测核酸的印迹方法Southenblot相类似，亦被称为Westernblot。免疫印迹（westernblotting）是在蛋白质电泳分离和抗原抗体检测的基础上发展起来一项检测蛋白质的技术。它将SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的高分辨力与抗原抗体反应的特异性相结合。典型的印迹实验包括三个步骤①蛋白质的电泳分离；②将电泳后凝胶上的蛋白质转移至固体膜上，用非特异性，非反应活性分子封闭固体膜上未吸附蛋白质区域；③免疫学检测。免疫印迹克服了聚丙烯酰胺凝胶电泳后直接在凝胶上进行免疫学分析的弊端，极大地提高了其利用率、分辨率和灵敏度，使其成为使用最广泛的免疫化学方法之一。

第一阶段为SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）。抗原等蛋白样品经SDS处理后带阴电荷，在聚丙烯酰膪凝胶中从阴极向阳极泳动，分子量越小，泳动速度就越快。此阶段分

离效果肉眼不可见（只有在染色后才显出电泳区带）。第二阶段为电转移。将在凝胶中已

经分离的条带转移至硝酸纤维素膜上，选用低电压（100V）和大电流（1～2A），通电45min

转移即可完成。此阶段分离的蛋白质条带肉眼仍不可见。第三阶段为酶免疫定位。将印

有蛋白质条带的硝酸纤维素膜（相当于包被了抗原的固相载体）依次与特异性抗体和酶

标第二抗体作用后，加入能形成不溶性显色物的酶反应底物，使区带染色。常用的HRP

底物为3，3，—二氨基联苯胺（呈棕色）和4-氯-1-萘酚（呈蓝紫色）。阳性反应的条带清晰

可辨，并可根据SDS-PAGE时加人的分子量标准，确定各组分的分子量。本法综合了

SDS-PAGE的高分辨力和ELISA法的高特异性和敏感性，是一个有效的分析手段，不仅

广泛应用于分析抗原组分及其免疫活性，并可用于疾病的诊断。在艾滋病病毒感染中此

法作为确诊试验。抗原经电泳转移在硝酸纤维素膜上后，将膜切成小条，配合酶标抗体

及显色底物制成的试剂盒可方便地在实验室中供检测用。根据出现显色线条的位置可判

断有无针对病毒的特异性抗体。

Westernblot实验步骤及注意事项

一.实验步骤

1.组织块称重

2.利用液氮、研钵粉碎组织块

3.加入RIPA缓冲液（每克组织3mlRIPA），PMSF（每克组织30μl，10mg/mlPMSF），利用Polytron进一步匀浆（15,000转/分*1分钟）维持4℃

4.加入PMSF（每克组织30μl，10mg/mlPMSF），冰上孵育30分钟

5.移入离心管4℃约20,000g（约15,000转）15分钟

6.上清液为细胞裂解液可分装-20℃保存

7.进行Bradford比色法测定蛋白质浓度

8.取相同质量的细胞裂解液（体积*蛋白质浓度），并加等体积的2×电泳加样缓冲液

9.沸水浴中3分钟

10.上样

11.电泳（浓缩胶20mA，分离胶35mA）

12.电转膜仪转膜（100mA40分钟）

13.膜用丽春红染色，胶用考马斯亮蓝染色

14.Westernblot试剂盒显色

15.分析比较记录

westernblot的实验步骤及注意事项的资料

1.把聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质电泳转移到硝酸纤维膜上。

1）转移缓冲液洗涤凝胶和硝酸纤维素膜，将硝酸纤维素膜铺在凝胶上，用5ml移液管在凝胶上来回滚动去除所有的气泡。

2）在凝胶/滤膜外再包一张3mm滤纸（预先用转移缓冲液浸湿），将凝胶夹在中间，保持湿润和没有气泡。

3）将此滤纸/凝胶/薄膜滤纸按照厂家建议方法放入电泳装置中，凝胶面向阴极。

4）将上述装置放入缓冲液槽中，并灌满转移缓冲液以淹没凝胶。

5）按照厂家所示接通电源开始电泳转移。

6）转移结束后，取出薄膜和凝胶，弃去凝胶。

2.将薄膜漂在氨基黑中快速染色，直至分子量标准显现时取出，记录下标准位置。

3.用100ml水洗涤纤维素膜，必要时可用脱色缓冲液。

4.膜置印迹缓冲液中于37℃保温1小时。

5.室温下，用PBS-Tween缓冲液洗涤薄膜。

6.用封口机将薄膜封入塑料袋中，尽可能不留空气。

7．袋的一角剪一缓冲液的小口，用透析袋夹紧。

8．混合：NGS(100微升)，印迹缓冲液中的抗体（10毫升），加在装薄膜的袋中，于室温下摇动2小时（或4℃过夜）

9．用总体积300mlPBS-Tween缓冲液，分4次在一浅盘中洗涤薄膜，每次75ml。

10.将连接生物素的羊抗兔IgG（40微升溶于10毫升印迹缓冲液/100微升NGS）加在袋内，于室温下摇动1小时。

11．按步骤9洗涤。

12．加入抗生素蛋白-HRP（40微升溶于10毫升印迹缓冲液/100微升NGS），于室温下摇动。

注意事项：

westernblot中转移在膜上的蛋白处于变性状态，空间结构改变，因此那些识别空间表位的抗体不能用于westernblot检测。这种情况可以将表达目的蛋白的细胞或细胞裂解液中的所有蛋白先生物素化，再用酶标记亲和素进行westernblot。实验中取胶和膜需带手套。

1.收集蛋白样品(Proteinsamplepreparation)

可以使用适当的裂解液，例如碧云天生产的Western及IP细胞裂解液，裂解贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品。对于某些特定的亚

细胞组份蛋白，例如细胞核蛋白、细胞浆蛋白、线粒体蛋白等，可以参考相关文献提取这些亚细胞组份蛋白，也可以使用试剂盒

进行抽提，例如碧云天生产的细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒。

收集完蛋白样品后，为确保每个蛋白样品的上样量一致，需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。根据所使用的裂解液的不同，需要

采用适当的蛋白浓度测定方法。因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大。如果使用碧云天生

产的Western及IP细胞裂解液，可以使用BCA蛋白浓度测定试剂盒。

2.电泳(Electrophoresis)

(1)SDS-PAGE凝胶配制

SDS-PAGE凝胶可以参考一些文献资料进行配制，也可以使用碧云天生产的SDS-PAGE凝胶配制试剂盒。该试剂盒提供了除水和配

胶器具外的所有试剂以及配制各种浓度SDS-PAGE的配方。

(2)样品处理

在收集的蛋白样品中加入适量浓缩的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。使用5X的SDS-PAGE蛋

白上样缓冲液可以减小上样体积，在相同体积的上样孔内可以上样更多的蛋白样品。5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液可以参考相关文献资料配制，也可以使用碧云天生产的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)。

100℃或沸水浴加热3-5分钟，以充分变性蛋白。

(3)上样与电泳

冷却到室温后，把蛋白样品直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。

为了便于观察电泳效果和转膜效果，以及判断蛋白分子量大小，最好使用预染蛋白质分子量标准。

电泳时通常推荐在上层胶时使用低电压恒压电泳，而在溴酚蓝进入下层胶时使用高电压恒压电泳。对于Bio-Rad的标准电泳装置

或类似电泳装置，低电压可以设置在80-100V，高电压可以设置在120V左右。SDS-PAGE可以采用普通的电泳仪就可以满足要求，

也可以采用碧云天的多功能电泳仪(带定时)。为了电泳方便起见，也可以采用整个SDS-PAGE过程恒压的方式，通常把电压设置在

100V，然后设定定时时间为90－120分钟。设置定时可以避免经常发生的电泳过头。

通常电泳时溴酚蓝到达胶的底端处附近即可停止电泳，或者可以根据预染蛋白质分子量标准的电泳情况，预计目的蛋白已经被适

当分离后即可停止电泳。

3.转膜(Transfer)

我们推荐在Western实验中选用PVDF膜。硝酸纤维素膜(NC膜)也可以使用，但硝酸纤维素膜比较脆，在操作过程中特别是用镊子

夹取等过程中容易裂开。膜的使用请参考生产商的推荐使用步骤。

夜。转膜时也可以使用碧云天的多功能电泳仪(带定时)。具体的转膜时间要根据目的蛋白的大小而定，目的蛋白的分子量越大，

需要的转膜时间越长，目的蛋白的分子量越小，需要的转膜时间越短。

在转膜过程中，特别是高电流快速转膜时，通常会有非常严重的发热现象，最好把转膜槽放置在冰浴中进行转膜。

转膜的效果可以观察所使用的预染蛋白质分子量标准，通常分子量最大的1-2条带较难全部转到膜上。转膜的效果也可以用丽春

红染色液对膜进行染色，以观察实际的转膜效果。也可以用考马斯亮蓝快速染色液对完成转膜的SDS-PAGE胶进行染色，以观察蛋

白的残留情况。

4.封闭(Blocking)

转膜完毕后，立即把蛋白膜放置到预先准备好的Western洗涤液中，漂洗1-2分钟，以洗去膜上的转膜液。从转膜完毕后所有的步

骤，一定要注意膜的保湿，避免膜的干燥，否则极易产生较高的背景。

用微型台式真空泵吸尽洗涤液，加入Western封闭液，在摇床上缓慢摇动,室温封闭60分钟。对于一些背景较高的抗体，可以在

4℃封闭过夜。在整个Western过程中我们推荐使用碧云天生产的侧摆摇床，侧向摆动速度比较缓慢，而且也容易让溶液覆盖蛋

白膜。

5.一抗孵育(Primaryantibodyincubation)

参考一抗的说明书，按照适当比例用Western一抗稀释液稀释一抗。

用微型台式真空泵吸尽封闭液，立即加入稀释好的一抗，室温或4℃在侧摆摇床上缓慢摇动孵育一小时。如果一抗孵育一小时效果

不佳，可以在4℃缓慢摇动孵育过夜。

回收一抗。加入Western洗涤液，在侧摆摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟。吸尽洗涤液后，再加入洗涤液，洗涤5-10分钟。共洗涤

3次。如果结果背景较高可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。

6.二抗孵育(Secondaryantibodyinucubation)

参考二抗的说明书，按照适当比例用Western二抗稀释液稀释辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗。

用微型台式真空泵吸尽洗涤液，立即加入稀释好的二抗，室温或4℃在侧摆摇床上缓慢摇动孵育一小时。

回收二抗。加入Western洗涤液，在侧摆摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟。吸尽洗涤液后，再加入洗涤液，洗涤5-10分钟。共洗涤

3次。如果结果背景较高可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。

7.蛋白检测(Detectionofproteins)

参考相关说明书，使用BeyoECL,Western荧光检测试剂等ECL类试剂来检测蛋白。

洗片时可以使用X光片自动洗片机。如果没有自动洗片机，可以用显影定影试剂盒自行配制显影液和定影液进行手工洗片。

8.膜的重复利用(Membranerecovery)

如果蛋白样品非常宝贵，可以使用Western一抗二抗去除液处理蛋白膜，以重复利用蛋白膜。

这个医院尿蛋白+,那个医院测又没了,尿蛋白的测定方法有哪些?

应该这样问更合理 ：

为什么这个医院尿蛋白+，那个医院测又没了？

或者：这个医院尿蛋白+，那个医院测又没了，为什么？

而提问者的问题突然跑到尿蛋白的检测方法上去了。

一、尿蛋白的检测方法，就有两种 ：尿蛋白定性检测和24小时尿蛋白定量检测。

1、定性检测是收集早上的第一次小便的中段尿送检。

2、定量检测需要把从头天早上到第二天早上点对点24小时内的尿液全部收集起来，记录总尿量，混匀后取少量送检。

二、为什么检测结果不一样：

这时临床中常遇到的情况之一，

还有遇到的情况之二：就是同一家医院的两次检测的结果也是这样（不一样），即：这次蛋白1+，下次没有；还有可能：这次是蛋白1+，另一次或2+，乃至3+或4+。

（一）、在同一家医院的两次检查结果不一样的 ：

人没毛病怎么会有蛋白呢？

是的，没毛病也会蛋白的，说明蛋白不是肾脏里漏出来的，而是自身的污染造成的。比如男性的前列腺液、精液；女性的阴道分泌物或外阴的分泌物。因为不会保证每次都有污染物所以就会有的时候是阳性，有的时候是阴性，基于此，严格的留取尿液标本（取样）的方法是：男性要排出一部分尿液后再留取（中段尿）；女性的不能在经期留取，要在经期过后3天之后，而且要清洗外阴后留取中段尿，非经期也可直接留取中段尿，或清洗外阴后留取更准确。如果是这种情况，再留取一次中段尿，结果肯定是阴性。

人有毛病，那怎么还会阴性呢？

有毛病也有轻有重，还有就是不同的毛病引起的。就是说，即使有毛病，也不是每时每刻排除的蛋白的量是恒定不变的，也有量多和量少的时候，量稍微多一点就1+，稍微少一点就阴性了。如果量很多，不论那次肯定都会是阳性，只不过有时候是1+，有时候多至4+。这时候要进一步查找到底是什么原因导致的。可以说尿液里蛋白阳性不一定一定是肾脏的疾病引起的，还可以是前列腺或膀胱或尿道引起的。

2. 假设，医院的化验有错。

可以推出，要么是人员操作有误，要么是机器或试剂本身有误。可以反复多验几次来证实，或通过第三家医院的化验来证实。

1、尿液里肯定有蛋白，阴性的结果的医院化验不准，其原因有两种可能性：a、人操作不正确；b、机器不准确，不论是试剂的问题还是程序的问题，还是其它问题都有可能。怎么证明呢？正确取得同一次（尿液）样本后，分送不同的医院，或同时送第三家医院！即使这样送，也不敢保证第三家的一定是准确的。

2、尿液里肯定没有蛋白，就能推出，第一个医院的化验不准。证明方法同“（二）中的1”。

3、两家医院的化验都准，那就是上面的“（一）”里分析的那些可能性。这时通过正确取样，反复化验来检验，或去第三家医院进行验证。验证的最佳方法是用同一天同一次的尿液样本分别送不同的医院。

简单说就是：要么是两家医院的化验结果都没错。要么是其中的一家的化验结果有错。 捎带着分析了一下假设同一家医院出现检测结果不一致的原因的可能性。

蛋白尿“+”，是指尿常规检查，尿中检测出蛋白质的一种异常结果。也是尿蛋白定性检测为阳性的一个表现。如果结果是“—”，就是尿蛋白定性检测为阴性。

为什么会出现这个医院化验尿蛋白+，而另一个医院化验又没有了？那是因为尿蛋白的来源有很多，首先我们分为生理性蛋白尿及病理性蛋白尿。按照部位不同，分为肾小球性蛋白尿和肾小管性蛋白尿。还有一种叫溢出性蛋白尿等等。

生理性蛋白尿常常见于发热以后、运动以后、暴饮暴食以后，还有一些特殊体位等等。我们叫体位性蛋白尿。病理性蛋白尿则见于各种各样的肾脏疾病。

所以，在我们去医院化验尿液的时候，一定要避免上述发热、运动、暴饮暴食等等。

尿蛋白定性检测，临床上有六个描述，分别为—、+—、+、++、+++、++++。表示为尿蛋白的浓度从阴性到逐渐升高达最高浓度的四个加号。而影响尿蛋白的浓度，一方面与肾脏疾病的严重程度有关，另一方面与我们的饮水量有关。也就是说，如果病人一天的饮水量比较大，尿蛋白就会被稀释，化验的结果就很好甚至是阴性。如果病人这一天饮水量少，尿蛋白就会被浓缩，化验结果就很差。

一个“+”的蛋白尿，相对是尿里面的蛋白浓度比较低。如果是在运动后、感冒发热以后、暴饮暴食后或者劳累以后化验为“+”蛋白尿，而平时正常状态下化验结果阴性，考虑为生理性蛋白尿。如果平时正常状态下化验结果为“+”，这一天饮水量比较大再化验结果为正常范围，仍然考虑为病理性蛋白尿。

因此，为了准确起见，化验小便时，应该是在正常情况下，取晨尿，也就是起床后的第一次小便。

不过，为了慎重起见，只要发现了蛋白尿，我建议需要进一步检查。

比如24小时尿蛋白总量，比如尿蛋白肌酐比值测定，比如尿蛋白电泳检查，比如尿微量白蛋白检查。

正常情况下，24小时尿蛋白总量30mg/24h，则称为微量白尿蛋白。

如果确实检测发现有蛋白尿，我们需要做尿蛋白电泳检查，以区分是选择性蛋白尿还是非选择性蛋白尿。非选择性蛋白尿也叫混合性蛋白尿，有较强的临床意义。

由此可见，临床上，检测蛋白尿的方法，一般有尿常规检查（尿蛋白定性），24小时尿蛋白总量，尿微量白蛋白检测，尿蛋白肌酐比值，尿蛋白电泳等五种方法。

如有不同意见，欢迎大家讨论。

非常感谢题主的邀请，这个问题比较偏门，但又比较专业，要解释起来还是比较抽象的。在临床上尿常规中蛋白的异常这属于肾内科的诊治范围，有时候确实有题主所说的这种情况，今天查“蛋白一个+”，明天查可能又没了。这有可能本身就是生理性蛋白尿，过一天后消失了其实也在情理之中，另一种情况就是和尿蛋白的检测方法有关，今天我就着“重尿蛋白的检测方法”来讲解。

前言

（一）尿蛋白定性检查

●试纸法

① 这是根据指示剂蛋白误差的原理，通过尿蛋白与试纸中指示剂 （例如四溴酚蓝） 结合产生的颜色反应，与标准颜色对比， 可以初估蛋白量 ，自动化分析仪可根据颜色深浅得出蛋白定性的结果，无非以下六种结果： 阴性 （＜0.1g/l）、 ± （0.1-0.2g/l）、 ＋ （0.2-1g/l）、 ++ （1-2g/l）、 +++ （2-4g/l）、 ++++ （＞4g/l）。

② 试纸条法对尿中不同蛋白质的敏感性其实各有不同。相对来讲，对白蛋白是最为敏感的，对球蛋白敏感性相对差一些。比如多发性骨髓瘤患者（球蛋白高）尿液中可出现大量的游离轻链，但是试纸法检测结果就可以呈“阴性”。注意了，这个检测方法要求 尿液必须新鲜 ，如果是变质的尿液产生的PH变化则会影响到实验检查结果，如果尿PH增高则可产生假阳性，所以这需要注意鉴别。

●磺基水杨酸法（磺柳酸法）

这种方法的灵敏度在0.05-0.1g/L，它的原理主要就是带负电荷的磺柳酸与尿中带正电荷的尿蛋白质相结合形成不溶性蛋白盐沉淀，然后根据浊度来用加号表示。这里其实无非也是以下六种结果： 阴性 （无浑浊现象）、 ± （轻微浑浊，隐约可见）、 + （明显的白色浑浊，但无颗粒出现）、 ++ （稀薄乳样浑浊，出现颗粒）、 +++ （乳浊，有絮片状沉淀）、 ++++ （絮状浑浊，有大凝块下沉）。这个试验比较灵敏，与清蛋白、球蛋白、糖蛋白和本周氏蛋白均能发生反应， 可作为干化学法检测尿蛋白的参考方法、

●加热醋酸法

这种方法的灵敏度为0.15g/L，它的原理则是加热使蛋白质变性凝固，加酸使尿液酸化利于蛋白沉淀，并使之析出的碱类盐溶解。其实它也是根据 尿液浑浊程度以及沉淀的多少 来判断结果（阴性-++++）。注意了，这种方法如果加酸过多，，蛋白质微粒获得电荷增加，可呈假阴性反应，所以在试验中可先加 1-2滴饱和氯化钠液 与尿液中，再进行操作误差则会小的多。

（二）尿蛋白定量检查

●双缩脲比色法

它是以磷钨酸乙醇溶液沉淀尿中的蛋白质，在碱性介质中蛋白质与铜离子形成紫色的络合物，与标准液比色来得出尿中蛋白质的含量。注意了，这个试验呢需准确的记录24小时的尿量，然后将尿液混合后再离心，当蛋白浓度较高时应稀释标本再操作。若疑有药物干扰时，可将尿蛋白沉淀用 无水乙醇洗涤3次 再操作。

●丽春红S法

操作方法是在尿标本中加入三氯醋酸和丽春红染料，形成尿蛋白染料复合物，然后离心沉淀，再加碱溶液使沉淀溶解。最后通过 比色测定 并计算蛋白含量。注意了，当尿中的血红蛋白浓度较高时会影响结果。离心后标本的上清液必须要全部去除，如果沉淀中夹带丽春红S则会 影响检测结果。

●考马斯亮蓝法

在酸性环境中，棕红色的考马斯亮蓝与尿蛋白通过疏水力结合，产生蓝色化合物，光谱吸收峰改变，这时候再 与标准液相比即可测定出尿蛋白的含量。 这种方法灵敏度较高，可测尿蛋白浓度范围为0.01-1g/L,需要样品量少，但不同蛋白之间差异较大。注意了，考马斯亮蓝溶液需要 定期新鲜配置 ，过滤后才可使用。

（三）尿微量白蛋白检测

当尿总蛋白定量在正常范围内，而尿白蛋白排泄率达20-200ug/min或尿白蛋白量＞30mg/d时，我们称为微量白蛋白尿。这主要可用于肾脏疾病的早期诊断， 如糖尿病肾病、高血压肾病、隐匿性肾炎时，尿微量白蛋白含量增加 ，并且很多出现时间在尿蛋白定性阳性出现之前，所以这个项目也是肾脏疾病早期诊断的指标之一。操作方法则可通过 放射免疫测定、免疫比浊法 、折射法 等方法进行检测。

（四）尿蛋白电泳分析

由于不同的尿蛋白发生机制可导致尿蛋白的组成成分不同，因此通过电泳技术可以为临床提供很有价值的诊断依据。 如果肾小球滤过屏障完好 ，尿蛋白含量极低，则电泳后染色的蛋白质条带信号极弱，以白蛋白条带为主； 如果肾小球滤过屏障异常 ，而肾小管重吸收功能正常，滤过的小分子蛋白不超过肾小管的重吸收阀值，电泳后蛋白条带常显示为大分子蛋白质和白蛋白； 如果肾小管功能受损和滤过量过多 ，则会同时出现小分子量的蛋白质条带。这个项目目前常用的检测方法主要有 醋酸纤维薄膜电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳 。

综合总结

关于尿蛋白的检测方法不论是定性检查、定量检查、微量白蛋白检测还是尿蛋白电泳分析均已详细的进行分析，题主所问到的“ 感觉尿常规里面的蛋白有时候一个加号，过一天再测又没了，这和测定方法有关系吗”， 我想说这和不同的检测方法是有关系的，由于其影响的因素比较多，所以会出现假性结果，这时候就不要过早下结论， 可多复查几次，并结合病史、临床症状来综合评判，也不可一味相信辅助检查结果。

回答这个问题之前首先应该清楚以下情况：

1，是同一次尿液，同一天在不同的医院检测的结果吗？

2，还是，同一个人，不是同一次尿液，不是同一天，在不同的医院检测的结果？

3，两次检查尿液标本都是清晨第一次尿液吗？

4，两次检查尿液标本都是头段尿液，还是留取的中段尿液？

5，患者是男性还是女性？

这些问题都会影响尿液蛋白的检测结果！

我来详细根据上述情况，分析检测结果的差异性！

同一次尿液，，同一天在不同的医院检测尿液蛋白，结果不一致，这种情况是仪器和试剂的问题！不同的医院检测尿液的仪器不一样，试剂也不一样，结果会有差异性，尤其是尿蛋白在+和-之间。

同一个人，不是同一次尿液，不是同一天，在不同的医院检测尿液蛋白结果不一致，这种情况有标本的问题也有仪器和试剂的问题，不建议才用这种方法检查。

两次检查尿液标本都是清晨第一次尿液？清晨第一次尿液很容易受到尿道分泌物和外阴分泌物的污染，导致尿液蛋白假阳性。

两次检查尿液标本都是头段尿液还是留取的是中段尿液！头段尿液极易受到分泌物的干扰，

性别对尿液标本的留取也有干扰性，男性患者如果有尿道炎，尿道分泌物会引起尿蛋白假阳性，尤其是头段尿液！女性患者外阴分泌物很容易影响尿液蛋白的检测，尤其是合并阴道炎的，阴道分泌物会进入尿液标本，导致尿液蛋白假阳性！

处理方法：

建议最好选择同一家医院检测，检测结果具有可靠性。

尿液标本的留取，最好留取至少2个小时的尿液（尿液在膀胱内的时间），并且留取中段尿液，最好是在留取尿液标本前清洗一下外阴，避免分泌物对检测结果的影响！

如果检测结果呈现阳性结果，建议重复检查一次，并且选择同一家医院进行检测，动态观察结果改变情况！

另外，尿蛋白的测定方法有哪些？就目前而言，现在绝大多数医院采用的是全自动尿液分析仪，尿蛋白是通过干化学法，仪器自动扫描测定的。有的小诊所或者个人在家使用干化学纸条，目测结果，具有差异性！

尿蛋白的检验方法，有3种，分别是尿蛋白定性试验、尿蛋白定量测定、尿蛋白电泳分析。

①尿蛋白定性试验：通常采用蛋白试纸法、磺基柳酸法、加热醋酸法3种方法。正常情况下，尿蛋白定性试验呈阴性。但此种检查方法易受一些因素的影响，可致假性结果，如尿酸盐含量高时，尿呈酸性反应，蛋白试纸法结果较实际情况低，磺基柳酸法易呈假阳性；大量使用青霉素时，磺基柳酸法易呈假阳性反应；使用磺造影剂时，磺基柳酸法、加热醋酸法均可出现假阳性反应；当尿呈强碱性时，假性结果更多，或出现蛋白试纸法假阴性反应，或出现磺基柳酸法和加热醋酸法的假阴性反应。当尿蛋白仅为一些特殊蛋白质时，蛋白试纸法和磺基柳酸法均不敏感。因此，在进行尿蛋白定性时，应综合各种因素，具体情况具体分析，选择适宜的方法。尽管定性试验比较方便，但有时难以反应蛋白尿的实际情况，有条件时，最好进行定量检查。

②尿蛋白定量测定：一般进行ECTkey=24小时尿蛋白定量 target=_blank24小时尿蛋白定量检测。 使用的方法比较多，有些方法虽然比较精确，如凯氏定氮法、双缩脲法等，但操作很复杂。临床多采用简易的半定量法，如艾司巴赫氏定量法、磺基柳酸比浊定量法。24小时尿蛋白定量在0．15～0．5克之间为微量蛋白尿，在0．5～1克之间为轻度蛋白尿，在1～4克之间为中度蛋白尿，大于4克（有学者定为3．5克）为重度蛋白尿。

③尿蛋白电泳分析：常用的方法有醋酸纤维薄膜电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、尿蛋白免疫电泳等方法。该方法主要从确定尿中蛋白质的种类出发，通过区分不同尿蛋白的种类，对某些疑难病症如多发性骨髓瘤、重链病等有诊断和鉴别诊断的意义。同时可以区别尿蛋白的分子量大小，这对区别蛋白尿的来源，以及检查尿中是否有特殊蛋白质具有重要的意义。

在你肾内医生面前卖弄一下。尿液的测定受影响因素较多。首先是和测量尿的时间有关，一般是晨尿较能反映正常水平，另外和前几天的饮食、饮水量有关联。还有和测量试剂、机器调试有关，测量过程中，一般要求换导管，清水清洗机器。还和前几个患者有关，但无论如何清洗，总有可能一些残液遗留，只要在允许范围内即可。况且又不可能每次化验前都让工程师来检测仪器，只能凭经验。所以，假如上一个病人尿蛋白含量高，就会影响下一个人的检测结果，这也就是为什么对蛋白含量一个+号要求病人复查或换医院检测

的原因。

您好，我是一名从事临床多年的内科医生，希望我的回答能帮到您。

临床上常用的判断尿蛋白的检测方法主要有二种：尿蛋白定性试验、尿蛋白定量测定。

一、尿蛋白定性试验： 目前几乎所有医院的尿常规检查里都包含尿蛋白定性这一项目。尿蛋白阳性提示可能存在各种急性肾炎、慢性肾炎、肾结核、泌尿系统感染甚至高热等情况。不过尿蛋白定性的结果分为阴性、阳性（包括一个+到四个+）。您所说的这种一个加号时有时无的情况其实在临床上也比较容易出现，但不是所有的阳性都一定是肾脏的器质性疾病导致的。因为这种检查方法易受一些因素的影响，出现假阳性结果。因此，在进行尿蛋白定性时，应综合各种因素，具体情况具体分析。特别是您所得这种一个加号时有时无的情况，为了确定是否准确，我们会推荐第二种方法。

二、尿蛋白定量测定 ：一般用一个小桶收集24小时的尿液，然后取样本进行尿蛋白的定量检测。24小时尿蛋白定量在0．15～0．5g之间为微量蛋白尿，大于0．5为蛋白尿阳性，大于3．5g就是为大量蛋白尿（多见于肾病综合征）。这种检测方法区别于定性实验，可以有具体的数值表示尿蛋白的多少，而且受其它因素干扰相对少，能准确反应身体真实情况。

临床上大多数情况下不能仅凭某一项异常指标或者某种症状就能妄下定论，因此，您所描述的这种情况建议进一步做24小时尿蛋白定量测定，如果数值低于0．15g，那就说明尿蛋白定性实验可能是假阳性结果。最后，祝您身体 健康 ！

可能蛋白量不多，各个医院检测的敏感性不一样。另外是不是都是晨尿，因为一个加的尿蛋白有可能多喝点水稀释一下就下降到定性测不出来的水平。建议同时查尿微量白蛋白和尿蛋白定量。

您好，很高兴能够回答您的问题。

尿蛋白“+”是尿常规中很常见的一项指标，也是提示肾脏是否出现问题的提示指标

尿蛋白的出现有两种可能，一是生理性的 二是病理性

病理性，常见的就是慢性肾脏病，不过只是出现一个加号并不能进行确诊，还是需要进一步的进行专业检查确诊；

生理性，日常的饮食，生活习惯，环境，小便器不干净，运动过量，感染，炎症等情况都有一定关系，一般保持良好的生活习惯，调整饮食3-5天左右的时间就会恢复正常。

测量蛋白尿的方式有两种一是，可以到医院进行尿常规检查，这样就是稍微比较麻烦以及费时间；二是，可以自行购买一些尿蛋白试纸，自己测的也比较方便。

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